纯氟油（yóu）Fluo-Oil 135(氟油（yóu）3M Novec HFE7500电（diàn）子氟化液的替代品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是一（yī）种纯氟化油，可（kě）用于替（tì）换氟（fú）油3M Novec HFE7500电（diàn）子氟化液。 Fluo-Oil 135氟（fú）油的化学和（hé）物（wù）理化学性质与3M Novec HFE7500 相似，如下表所（suǒ）示:

优势

生物相（xiàng）容性、可重复性和稳定性。

如何使用？

氟油Fluo-Oil 135用于稀（xī）释FluoSurf Neat表面活性剂（jì）或（huò）已经用（yòng）Fluo-Oil 135油稀释的表面活性剂。

（由（yóu）于FluoSurf Neat表面（miàn）活性（xìng）剂是一种PFPE-PEG结（jié）构（gòu）的复杂高效纯（chún）表面活性剂，因（yīn）为类似于PFPE-PEG结构的纯表面活性（xìng）剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌（qiàn）段或三嵌段表（biǎo）面（miàn）活性剂，Surf 含氟表面活（huó）性剂等，基本上都可以使用纯氟（fú）油Fluo-Oil 135进（jìn）行稀释。稀释的浓（nóng）度（dù）从0.2%到（dào）12%之间。）

保存

室温下避（bì）光保存

安全注意事（shì）项

● 避免吸（xī）入（rù）、摄入和接触皮肤和眼睛

● 穿戴耐化学腐蚀的个人（rén）防护（hù）装备

● 戴上合适的（de）手套

● 穿合（hé）适的防护服

● 戴（dài）侧护罩的安（ān）全眼（yǎn）镜

与3M HFE7500油产生液滴性能的测试比较

分别用3M HFE7500和（hé）Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表面（miàn）活性剂，得到4w/w%的质量浓度。

水滴产生或油包水液（yè）滴产生的两相流速：

油相流速为（wéi）300μL/hr，水相（xiàng）流（liú）速为（wéi）100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧光素的（de）PBS溶液（用于测试液滴的泄露）

倒置显微镜观察和（hé）Image J软件分析。

一（yī）、液滴（dī）尺（chǐ）寸（cùn）及其分布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产（chǎn）生相似尺（chǐ）寸的水滴。在既定流（liú）速参数下（xià），液滴的平均直（zhí）径为110μm。液滴尺寸的CV分别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴稳定性

大多数（shù）研究团队使用（yòng）液滴微流体（tǐ）进行细胞封（fēng）装或（huò） PCR 应用。 因此（cǐ），需要（yào）通过 PCR 的加热循环以及在 37°C 下长期（qī）孵育来产生稳定的液滴。 表面（miàn）活（huó）性剂的选择（zé）至关重要，但选择油同样重（chóng）要，以（yǐ）确保可（kě）重复的实验以及（jí）单分散液滴群的生成和保存（cún）。

分别从三个方面测试液滴的（de）稳定（dìng）性：一是把液（yè）滴重新注入到玻璃（lí）观察（chá）腔室内；二（èr）是经典（diǎn）的PCR热循环过程，循环（huán）过程30次，每次热循环为（wéi）98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运（yùn）行10s；三是置于37℃的培养箱（xiāng）内放（fàng）置3天。对1万（wàn）个液滴（dī）进行分析。

无论（lùn）是在 Novec™ HFE 7500 还是（shì） Fluo-Oil™ 135 中形成（chéng） FluoSurf™ 稳定的液（yè）滴（dī），在 PCR 加热循环后或在 37°C 孵（fū）育 3 天后（hòu），液滴平均（jun1）尺寸（cùn）在生成时（shí）保持不变 [约（yuē） 110μm (0.7nL)] 。此（cǐ）外，液滴种群仍然是单（dān）分散的。 根据统（tǒng）计（jì）分析（xī），计算出在（zài）加（jiā）热（rè）循环后，只（zhī）有 5% 的整体液滴的大小与平均初始（shǐ）液滴（dī）直（zhí）径的差异超过 10%。

将（jiāng）氟化油从 Novec™ HFE 7500 切换到 Fluo-Oil™ 135 对（duì）液滴稳定性没有影（yǐng）响。

三、液滴内的分（fèn）子滞留

基于液滴的（de）化（huà）学或生化分析依（yī）赖于试剂在单个（gè）液滴中保持隔离。 泄漏到连续相和液滴之间的交换，即（jí）使很低（dī），也（yě）会影（yǐng）响结果的完（wán）整性，因此，分子保留是选择氟化油时要（yào）考虑的（de）重要参数。 众（zhòng）所周（zhōu）知，氟化（huà）油会（huì）限制液滴之间的分（fèn）子交换，因此应验证切换油的影响（xiǎng）。

同时生成两（liǎng）种油包水乳液[“空”（负载 PBS）和“满”（负（fù）载荧光素）液滴]，一次使（shǐ）用 Novec™ HFE7500，然后使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相。 两（liǎng）种混合物，每一种都包含两个种群，在 37°C 下孵育，并（bìng）在不同的时间点拍（pāi）摄照片。 使用 ImageJ 软件对液滴内（nèi）荧光强度的（de）演变进行（háng）了统计定量分析。

上（shàng）图显示了两个群体之间平（píng）均（jun1）荧光（guāng）强度（dù）差异的演变（biàn）（染料加载和空（kōng）液滴）以及在初始时间点和 48 小时后相关的荧（yíng）光和明场图片（piàn）。

在 24 小时的过程中，两种氟化（huà）油（yóu）产生的液（yè）滴中荧（yíng）光素的泄漏率相（xiàng）似（约 15% 泄（xiè）漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生（shēng）液（yè）滴的情况下保（bǎo）持恒定 3 天（tiān）。相反，在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴（dī）的泄漏继续减少并达到 30% 左右。 这种较长孵（fū）育时间的较（jiào）差保留（liú）性能可归因于后一种油的粘度（dù）略（luè）低，加速了（le）液滴之间更快的分子交换。

结（jié）论

对于基于液滴的（de）微流体应用，从一种氟化（huà）油类型切换到另一种类型可能会对微流（liú）体实验的过程产生重大影响，尤其是对液滴的有（yǒu）效生成产生重（chóng）大影响（xiǎng）。 在（zài）氟油3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和（hé） 氟油Fluo-Oil™ 135 的（de）情况下，已证实更换这两种氟（fú）化油对实验条件和结果没（méi）有影响。 当使用（yòng） Fluo-Oil™ 135 作为连续（xù）相时，甚（shèn）至可以观察到（dào）荧（yíng）光素在（zài）液滴（dī）内（nèi）的更好保留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是（shì）用于（yú）液滴微流（liú）体应用的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代（dài）品。